Staining (pewarnaan)

1.Pewarnaan Negatif
Tujuan
Mempelajari penggunaan prosedur pewarnaan negatif untuk mengamati morfologi organisme yang sukar diwarnai oleh pewarna pewarna sederhana.

Prinsip
Pewarnaan negatif memerlukan pewarna asam seperti eosin atau negrosin.pewarna asam memiliki negatif charge kromogen,tidak akan menembus atau berpenetrasi ke dalam sel karena negative charge pada permukaan bakteri.oleh karena itu,sel tidak berwarna mudah dilihat dengan latar belakang berwarna.

Bahan
Biakan pada agar nutrient miring umur 24 jam bakteri Escherichia coli,Bacillus cereus,dan staphylococcus aureus.

Reagensia
Nigrosin atau tinta India

2.Pewarnaan Sederhana
Tujuan
Mempelajari kegunaan pewarnaan untuk mempertinggi kontras antara sel dan sekelilingnya dan mengamati ciri ciri bakteri.

Prinsip
Pada pewarnaan sederhana,bakteri diwarnai oleh reagen tunggal.pewarna dasar dengan kromogen muatan positif disarankan,selama asam nukleat bakteri dan komponen dinding sel membawa muatan negatif yang menyerap dengan kuat dan mengikat kation kromogenPerlu diperhatikan lamanya waktu pewarnaan tergantung pada jenis pewarna yang digunakan.Untuk karbol fuchsin membutuhkan 15-30 detik,Kristal violet 2-60 detik,dan Methilen Blue 1-2 menit
Bahan
Biakan pada agar nutrient miring umur 24 jam bakteri Escherichia coli,Bacillus cereus,dan staphylococcus aureus.

Reagensia
Methylen Blue,Kristal violet,dan Karbol Fuchsin.

3.Pewarnaan Gram
Tujuan
Mempelajari prosedur pewarnaan Gram,memahami pentingnya setiap langkah dalam prosedur tsb,dan secara umum memahami reaksi reaksi kimiawi yang terlibat di dalam proses tersebut.

Prinsip
Bakteri dengan pewrna utama (Primary stain) yaitu dengan kristal violet atau Gentian violet akan berwarna ungu,melalui fiksasi warna dengan lugol akan menguatkan pelekatan warna utama,penambahan alcohol akan melunturkan atau memucatkan zat warna utama sehingga pada sel Gram negatif sel menjadi tidak berwarna tetapi pada sel Gram positif tidak mengalami pelunturan sehingga tetap berwarna ungu.pada pemberian pewarna tandingan (counterstain) yang berbeda dengan pewarna utama yaitu safranin menyebabkan bakteri gram negatif akan menyerap warna tsb menjadi merah.

Bahan
Kultur bakteri Escherichia coli,Staphylococcus aureus,dan Bacillus cereus(umur 24 jam) pada agar nutrien miring

Reagensia
•Kristal violet
•Lugol
•Alkohol 95 %
•Safranin

4.Pewarnaan Tahan asam
Tujuan
Mempelajari dasar dasar kimiawi pada reaksi tahan asam dan kinerja prosedur pewarnaan tahan asam untuk membedakan bakteri tahan asam dan tidak tahan asam.

Prinsip
Pemanasan akan membantu penyerapan zat warna utama (karbol fuchsin) melalui pemberian larutan pemucat (asam alkohol) bakteri tahan asam tetap berwarna merah sedangkan pada bakteri tidak tahan asam zat warna utama akan luntur sehingga pada penambahan warna kedua (Methylen blue) bakteri akan menyerap zat warna tersebut (biru).

Bahan
Biakan berumur 24-48 jam :
Mycobacterium Sp,S.aureus dalam TSB

Reagensia
Karbol fuchsin
Asam Alkohol
Methylen Blue

5.Pewarnaan Spora
Tujuan
Mengenal dasar dasar kimiawi pada pewarnaan spora dan kinerja dari prosedur untuk membedakan spora bakteri dan bentuk vegetatif.


Prinsip
Pemanasan akan mengembangkan lapisan luar spora sehingga zat warna utama dapat masuk masuk ke dalam spora sehingga berwarna hijau.melalui pendinginan warna utama akan terperangkap di dalam spora,dengan pencucian zat warna utama yang ada pada sel vegetatif akan terlepas sehingga pada saat pewarnaan kedua (safranin), sel vegetatif akan berwarna merah.

Bahan
Biakan berumur 48-72 jam
Bacillus cereus dalam agat nutrien miring
Clostridium butyricum dalam Tioglikolat
Reagensia

6.Pewarnaan Granula
Tujuan
Mempelajari dasar dasr kimiawi dan kinerja prosedur pewarnaan granula.

Bahan
Corynebacterium diphtheriae dalam agar Loeffler
Reagensia
Toluidin blue
Malachite Green
Methylen blue
Kristal violet
Krisoidin
Alkohol 95 %


7.Pewarnaan Kapsul
Tujuan
Balajar melakukan prosedur pewarnaan kapsul bakteri

Bahan
Klebsiella pneumoniae berumur 36 jam dalam media cair.

Reagensia
Kristal violet
CuSO4.5H2O 20 %
Methylen Blue atau Safranin

8.Pewarnaan Flagella
Tujuan
Mempelajari dasar dasar kimiawi dan kinerja prosedur pewarnaan flagella

Bahan
Biakan Proteus vulgaris dan Pseudomonas aeruginosa.
Reagensia
Kristal volet
Asam alkohol
Pewarna flagella-Gray